Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的过程之中逐渐扩展

从第一次显现胰脏自身抗本体到显现1DF白血病医学征状的的发展部将在儿童末期就有很好的描绘出，多个胰脏自身抗本体感染性的儿童早先有70%在肝脏匹配后10年内患上白血病，而随访15年的儿童这一比重增高到84%。来得之下，占多数医学1DF白血病一半以上的DF1DF白血病的得病机制还未想得到充分的研究课题。

越来越多的人开始用于仍须系统来定义1DF白血病的的发展：形态在显现多种胰脏自身抗本体时进到第1过渡阶段，显现血糖异常时进到第2过渡阶段，显现征状时进到第3过渡阶段。一些多发胰脏自身抗本体感染性的形态，在1期和2期，的发展较很慢，并发展为得病的1DF白血病。我们早先描绘出了一两组在首次测定到多种胰脏自身抗本体结果显示后将近10年无白血病的亦非很慢的发展者，这两组病症人数少，但特征非常明确。随后，我们推测胰脏自身免疫专一性CD8+T本站粒本体化学反应在的发展缓很慢的病症早先基本不存在，但在全面性得病和值得注意的白血病病症早先很容易测定到。这可能暗示，与的发展病症来得，这些病症自身免疫化学反应的适度增强。

中期研究课题暗示，尽管适度性T本站粒本体(Treg)数量正常，但白血病病症存在一些系统缺陷，其早先包括对IL-2的化学反应能力减少。此外，白血病病症早先的物理现象CD4+T本站粒本体可能对适度更是具抵抗性，体现为物理现象T本站粒本体的诱发移向，人为产生的Treg和人本体内产生的抑止Treg，以及免疫经历的CD4+T本站粒本体早先IL-2化学反应移向。本研究课题的用以是描绘出了CD4+适度性T本站粒本体(Treg)在这群人亦非缓很慢的发展者早先的特征，他们的总人数为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

方法：BOX研究课题是一项以人群依此的交叉研究课题，在21岁以下确诊的病症亲族早先检查1DF白血病的危险因素。我们早先描绘出了长期缓很慢的发展者的特征，他们保持稳定多重胰脏自身抗本体感染性超过10年，但未显现白血病的医学征状，很慢性或非来进行性自身免疫。随后，10名在此期间保持稳定无白血病并不想提供大量血液结果显示的缓很慢的发展者纳入T和B本站粒本体系统分析。在现阶段的研究课题早先，8名很慢的发展者(SP两组)，早先位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁错综复杂的胰脏自身抗本体感染性。所有的参加者都属于1DF白血病的发展的1期，尽管一些人随后失去了胰脏自身抗本体对某些免疫的感染性化学反应，然而，一名病症仍然属于2期将近6年，但未显现医学征状，一名病症被病症为白血病，该受试者72岁，在野外实验者结果显示时，其HbA1c上升到53 mmol/mol(7%)，在数据处理早先对该供本体来进行了直接分析报告。分离外周血单个核本站粒本体(PBMCs)，转用多给定流式本站粒本体拳法和T本站粒本体诱发试验车分析报告供本体早先Treg的频带、专一性和系统。用于FlowSOM和CITRUS(聚类鉴定、表征和重返)来进行无行政官员聚类分析，分析报告Treg专一性。

结果：与卫生供本体来得，来自很慢的发展本体的无意识CD4+T本站粒本体的行政官员聚类显示，触发的无意识CD4+ Treg频带增高，与糖皮质激素抑止的TNFR特别细胞内(GITR)合理化增高有关。一名HbA1c上升的病症与的发展缓很慢者和最简单的对照两组来得，Treg谱有所相异。系统分析暗示，与卫生供本体来得，来自缓很慢的发展本体的Treg诱导的CD4+物理现象T本站粒本体诱发明显损毁。体现为对物理现象CD4+T本站粒本体CD25和CD134合理化的诱发增高。

三幅1 透彻的专一性分析显示，CD4+Treg亚DF在很慢的发展配置文件早先增高。由FlowSOM生成的Treg四楼，聚集在来自所有供本体的来生CD4+CD45RA -本站粒本体上。根据标上物合理化鉴定单单10个元簇:无意识T本站粒本体_1;无意识T cell_2;无意识T cell_3;无意识T cell_4;CD49b无意识T本站粒本体;HLA-DR + GITR +无意识T本站粒本体;磁盘Treg_1;磁盘Treg_2;磁盘Treg_3;和磁盘Treg_4。(a)用于9个相异Treg标上生成的10个元簇的MST。每个路由器值得一提的是一个空降兵(100个空降兵)，很大的元空降兵(10个元空降兵)在路由器两组周围着色。每个路由器早先的饼三幅回应单个标上的合理化级别。(b)每个元聚类的热三幅，以显示整本体标上合理化。(c, d)为HD两组(c)和SP两组(d)生成三幅，以及FlowSOM识别的每个元簇的覆盖层。(e-l)相对来说同位素为每个metacluster箱子本站三幅(同位素> 0.05%)具体为HD和SP两组:磁盘Treg_2 (e),磁盘Treg_3 (f),磁盘Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +无意识T本站粒本体(h)、无意识T cell_1(i),无意识T cell_2 (j),无意识T cell_3 (k) n d CD49b无意识T本站粒本体(l)。黄色白点值得一提的是**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检验。此键适用于三幅形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

三幅2 用于CITRUS的预测模DF证实，Treg频带的增高是的发展缓很慢的标志。国际标准暂时性(a - f)和柑橘分析(g-k)比较SP参加者和最简单的HD参加者在CD4+CD45RA−T本站粒本体上的关联。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群本体的值得一提的是性三幅。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR合理化来进行分离，模拟器FlowSOM群本体。(b) HD(黑点)和SP(蓝点)两组以及供本体SP 606(黄色)早先CD25+ cd127的频带汇总三幅。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+暂时性子集的箱子本站三幅;(c) HLA-DRloGITR−(磁盘Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(磁盘Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(磁盘Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+磁盘T cell)。(g - i)柑桔簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3合理化强度着色，箭头突单单的簇被识别为SP和HD配置文件错综复杂的相异。(j)箱子本站三幅显示了在SP(蓝点)和HD(灰点)两组早先，CITRUS无意识Treg_3和Treg_4的相对来说同位素(比重)。(k)直方三幅显示每个簇的专一性(粉红色)和Treg标上相对来说合理化与故事情节合理化(紫色);上列，磁盘Treg_3;上面一行，磁盘Treg_4。故事情节与所有其他簇早先标上的合理化有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检验

三幅3 与卫生献血者来得，的发展缓很慢者无意识treg的GITR增高。每个无意识CD4+T本站粒本体元簇(无意识T本站粒本体_1;无意识T cell_2;无意识T cell_3;CD49b +无意识T本站粒本体;HLA-DR + GITR +无意识T本站粒本体;磁盘Treg_2;磁盘Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)测定每个合理化标上的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)配置文件的合理化热三幅(sp606不包括在内)。(c,d)无意识Treg_4元簇早先所有HD(灰色)、所有SP(紫色)和SP 606(黄色)的FlowSOM GITR合理化接在，显示直方三幅(c)和汇总三幅(d)。Wilcoxon配对符号秩和检验，p< 0.07(黄色)所有供本体包括，p< 0.05(紫色)供本体SP 606和最简单的HD不包括在测试早先。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs早先GITR合理化，从国际标准暂时性，从所有HD(灰色)、所有SP(紫色)和SP 606(黄色)接在，显示直方三幅(e)和汇总三幅(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对符号秩检验

三幅4 来自缓很慢的发展的CD4+ treg本站粒本体控制物理现象CD4+T本站粒本体的能力减少。SP两组用紫色的本站和白点回应，HD两组用金色的本站和白点回应，黄色的本站/白点回应供本体sp606。用于CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T本站粒本体来进行分选。CD4+CD25−(；也者)被标上为CFSE, Treg按辨别的比重高锰酸钾。用抗CD3 /28微珠再生本站粒本体，指导3天后来进行流式本站粒本体拳法测定。(a-d)与CD4+；也者相对来说应的treg指导(自本体)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD；也者指导。(a,b,f) CFSE细胞分裂(a,e)和CFSE诱发多于(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的诱发多于。用于感染性对照(触发的鼓动本站粒本体则有treg)计算诱发多于。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

三幅5 物理现象CD4+T本站粒本体对缓很慢的发展的T本站粒本体再生的诱发更是敏感。SP两组用紫色的本站和白点回应，HD两组用金色的本站和白点回应，黄色的本站/白点回应供本体sp606。用于CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T本站粒本体来进行分选。CD4+CD25−(；也者)被cfsel标上，treg按辨别的比重高锰酸钾。用抗CD3 /28微珠再生本站粒本体，指导3天后来进行流式本站粒本体拳法(CD25反染)和本站粒本体因子分析。HD Treg与HD、SP或sp606；也者共同指导。(a,b) CFSE细胞分裂(a)和CFSE诱发百分部将(b)。(c,d) CD25诱发百分部将(c)和CD134诱发百分部将(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共指导早先的合理化。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

论证：我们得单单的论证是，来自缓很慢的发展子的再生无意识CD4+Treg在GITR合理化早先想得到了扩大和非常丰富，合理化了进一步研究课题Treg在1DF白血病可能性形态早先的异质性的有效性。

原文单单处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28